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2022年梅州市人民医院试管婴儿移植费用高吗?
来源:http://www.jiaoan122.com  日期:2022-08-29



ELISA样本制备指南及注意事项

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定义及介绍

ELISA(enzyme linked immunosorbent assay,酶联免疫吸附测定)是最基础的免疫学实验之一,其理论基础是抗原抗体的特异性反应。ELISA因其特异性强、灵敏度高、稳定性好而被广泛使用。ELISA试剂盒检测样品包括血清、血浆、细胞培养上清、灌洗液或尿液等生物样本,实验操作步骤并不繁琐,但实验完成后需要把样本检测结果OD值转化为浓度值,从而供下一步分析所用,因此样品的预处理对于后续数据处理和结果分析非常重要。



样本制备指南


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血清

全血样品于室温放置2小时或2-8℃过夜后于2-8℃,1000×g离心20min,取上清即可检测。收集血液的试管应为一次性的无内毒素试管。避免使用溶血,高血脂样品


2.血浆

抗凝剂推荐使用EDTA-Na

2

,样品采集后30min内于2-8℃,1000×g离心15min,取上清即可检测。

3组织匀浆/组织全蛋白

用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液,称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,在冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行反复冻融或超声破碎。最后将匀浆液于2-8℃,5000×g离心5-10min,取上清检测。

其余方法:在分析天平(AL204型)上,称量50-100mg组织样本。在样本中加入5倍质量体积的含1%PMSF的1×PBS缓冲液;并用小剪刀等工具将组织样本剪碎(尽可能小块)。注:1×PBS缓冲液使用前,需加入PMSF,现用现加,PMSF终浓度为1mM。打开超声破碎仪,将超声破碎仪的功率调至25%,超声时间2s,间隔时间5s,总时间2min。放入样本,冰上超声3min。视样本匀浆情况调整总时长。超声完成后,将样本放于4℃或冰上裂解30min。打开离心机,将转速调至12000×g;将样本放入离心机,离心10min,取上清,按需要分装,于-20℃贮存。注:留取20μL样本,用于后续BCA法测定样本蛋白含量。

组织匀浆液或组织全蛋白中的蛋白浓度对于检测实验的影响至关重要,建议样本蛋白浓度至少1mg/mL以上,较低浓度蛋白的组织匀浆液有可能导致ELISA检测失败。


4.细胞提取液

贴壁细胞

用冷的PBS轻轻清洗,然后用胰蛋白酶消化,1000×g离心5min后收集细胞;

悬浮细胞

可直接离心收集。收集的细胞用冷的PBS洗涤3次。每10

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个细胞中加入150-200μLPBS重悬(推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂;若含量很低可减少PBS的体积)并通过反复冻融或超声使细胞破碎。将提取液于2-8℃,1500×g离心10min,取上清检测。注:留取20μL样本,用于后续BCA测定。

其余方法:

对于

贴壁细胞

:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。以2百万细胞为例,在样本中加入100μL的含1%PMSF的1×PBS缓冲液,震荡混匀细胞,4℃或冰上裂解30min。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。必要时可以进行超声处理,超声步骤与组织样本相同。

对于

悬浮细胞

:离心收集细胞,以2×10

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细胞为例,在样本中加入100μL的含1%PMSF的1×PBS缓冲液,震荡混匀细胞,4℃或冰上裂解30min。用手指轻弹悬浮细胞以充分裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成(5-10)×10

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细胞/管,然后再裂解。必要时可以进行超声处理,超声步骤与组织样本相同。注:1×PBS缓冲液使用前,需加入PMSF,现用现加,PMSF终浓度为1mM。打开离心机,将转速调至12000×g;将样本放入离心机,离心10min,取上清,按需要分装,于-20℃贮存。注:留取20μL样本,用于后续BCA法测定样本蛋白含量。



5.细胞培养上清或其他生物体液

收集液体后于2-8℃,1000×g离心20min,除去杂质及细胞碎片。取上清检测。注:因细胞培养基中的胎牛血清影响或其他生物体液中杂蛋白的影响,不建议进行BCA法测定样本蛋白含量。

实验细节与注意事项

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收集血液应避免产生溶血现象。红细胞破碎,释放大量的过氧化物酶,会影响ELISA检测中的辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(AP)的酶促反应,造成检测结果的不确定性。

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样品收集后若在1周内进行检测可保存于2-8℃,若不能及时检测,请按一次使用量分装,冻存于-20℃(1个月内检测),或-80℃(3个月内检测),避免反复冻融。在检测前,冷冻过的样本应缓慢地融化并离心除去冻融过程产生的沉淀物。室温混匀后使用。

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试剂盒检测范围不等同于样本中待测物的浓度范围,建议实验前通过相关文献预估样本中待测物的浓度并通过预实验确定样本的实际浓度情况。如果样品中待测物浓度过高或过低,请对样本做适当的稀释或浓缩。

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检测样本的稀释推荐多步稀释法,常规稀释检测为血清/血浆检测稀释度为2倍、20倍、200倍;细胞上清稀释度为5倍、50倍、500倍;建议实验前通过相关文献预估样本中待测物的浓度。

对于稀释倍数比较大的检测样本,参考稀释方案如下:

稀释100倍:一步稀释。取5μL样本到495μL标准品/样本稀释液内,做100倍稀释;

稀释1000倍:两步稀释。取5μL样本到95μL标准品/样本稀释液内,做20倍稀释,再取5μL 20倍稀释样本到245μL标准品/样本稀释液内,做50倍稀释,总共稀释1000倍;

稀释100000倍:三步稀释。取5μL样本到195μL标准品/样本稀释液内,做40倍稀释,再取5μL 40倍稀释样本到245μL标准品/样本稀释液内,做50倍稀释,最后取5μL 2000倍稀释样本到245μL标准品/样本稀释液内,做50倍稀释,总共稀释100000倍;

每步稀释时取液量不少于3μL,稀释倍数不超过100倍。每步稀释都需混合均匀,避免起泡。


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若所检样本不在说明书所列样本之中,建议做预实验验证其检测有效性。

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若使用化学裂解液制备组织匀浆或细胞提取液,由于引入某些化学物质会导致ELISA测值出现偏差。

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某些重组蛋白可能与试剂盒中捕获或检测抗体不匹配而出现不能检测的情况。

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对于组织匀浆、组织全蛋白、细胞提取液等蛋白提取样本,经BCA法测定样本蛋白含量后,建议进行蛋白浓度的统一化,避免因组织重量、细胞数、产物体积等因素造成的人为误差;例如,统一全部检测样本浓度为1-2mg/mL,进行后续的稀释和检测。

2022年梅州市人民医院试管婴儿移植费用高吗?


每次月经第十四五天卵泡就停止生长,还出血,6.7天后出血停止卵泡又开始发育,但长的很扁,受孕不成功。治疗了大半年了,效果也没有很好,不想再折腾了,准备直接去做试管婴儿,就想请问下大家2022年梅州市人民医院试管婴儿移植费用高吗?

2022年在梅州市人民医院做试管移植胚胎费用并不高,一般移植一次仅需5000-7000元即可,如果涉及多次移植费用自然会增加。据在该院做过试管婴儿的姐妹了解到,目前在该院做试管费用都在3-5万元不等,其中移植手术收费在6000元左右两枚,如果是移植一枚会稍便宜一些,但是也便宜不到太多。

2022年梅州市人民医院试管费用

梅州市人民医院(梅州市医学科学院、黄塘医院、中山大学附属梅州医院)创建于1896年,其前身是瑞士巴色教会创办的德济医院,是梅州市大型综合性三级甲等医院。目前梅州市人民医院生殖医学中心已开展了夫精人工授精技术、常规体外受精-胚胎移植技术、卵胞浆内单精子显微注射技术。下面是一位姐妹分享的在该院做试管的费用,具体如下:

1.6月6日去梅州市人民医院做b超检查,发现已经有大卵泡,按原计划打17天的达菲林现改为只打6天,花费875.5元;

2.9月11日、12日继续打针,返医院做了b超,医生继续开了6天;

3.18日再回医院花了1551.3元,老公的复方玄驹胶囊7盒药去了560元;

4.19日达菲林822元,下次的b超50元、验血90元。真高兴啊,离宝宝又进了一步;

5.20日开了5天的促排卵的药=4334.78元的促排针,由于没有人和我分针达菲林,5针,每次只用一半,不然能省340元;

6.9月23日b超卵泡大概是6.5-11.5的大小继续打3天促排花费:1925.28(果纳芬、尿促)+(3.9+8.1)卫生材料费+50(BC)=1987.28;

7.9月27日促排第10天了开了3天的针给我花了1679元;

8.9月28日BC检查下右卵巢都有17、16、15大小卵泡4个左右,开销330多,其中明天验血的就210多元了;

9.9月29日开了一次促排,780元,加54元b超和注射费;

10.9月30日b超已经有21.5的卵泡,然后开了手术费等一系列的钱花了5818元;

11.10月2日取卵12个开销800多元,移植花了6000元这样。

其实以上的费用统计并没有做完整,这其中还包括有挂号等都没有计算在内,并且还有一些零散的费用都没有算比如来回路费,如果将这些加在一起的话,大致要花4万多左右。但这也仅作为参考,因为每个人的情况不同花费的费用也是不同的,下面还为大家收集了几位姐妹在梅州市人民医院做试管的费用情况。

梅州市人民医院的第二代试管婴儿费用参考数据为3w左右,包括前期的检查费用5k左右,促排卵打针吃药花费1w~1.5w,取卵加上培养需要1w左右,进行移植5k左右,当然这只是一个参考的数值,具体的费用会根据每个人制定的方案进行变化。

网友永远开心

试管婴儿费用主要包括手术和使用药物这两个大的部分,因为不同患者的症状,使用的药物剂量和时间都不一样,所以会造成所用的费用不等。

网友在路上

医院通常会有费用公示。但是仅根据公示的费用,很难推测实际的花费。最主要的原因是每个人情况不同,别人的费用只能供参考。每个人身体情况不同,所以方案不同,促排药物不同,促排周期长短不同。促排药费用占比较高,如果多次促排费用会成倍增加。

网友vanlife

同城试管婴儿医院费用导航

截止目前,广东省准入开展试管婴儿的医院有56家,其中三代试管婴儿医院6家,为帮助更多人选择合适的医院,了解相应生殖中心的试管婴儿费用、成功率、流程等信息,特整理2022年广东试管婴儿医院大全(顺序先后按照准入时间排序)以供参考。

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